Der Konflikt mit dem Iran eskalierte am fünften und sechsten Tag dramatisch, als ein U-Boot der US-Marine die iranische Fregatte IRIS Dena in der Straße von Hormus torpedierte und versenkte. Dies stellt den ersten bestätigten U-Boot-Torpedoabschuss seit dem Zweiten Weltkrieg dar. Etwa 130 Seeleute befanden sich an Bord des Schiffes, als es sank, wie US-Militärvertreter mitteilten. Der Angriff erfolgte, nachdem General Dan Caine, Vorsitzender der Vereinigten Stabschefs, erklärt hatte, dass amerikanische und israelische Streitkräfte die Marinekapazität des Iran effektiv neutralisiert hätten, wobei seit Beginn der Operationen am 28. Februar mehr als 20 iranische Schiffe versenkt oder zerstört worden seien.
In einer parallelen politischen Umwälzung trat der iranische Expertenrat am 4. März heimlich in Ghom zusammen und wählte Mojtaba Chamenei, den 55-jährigen Sohn des getöteten Obersten Führers Ajatollah Ali Chamenei, zu dessen Nachfolger. Die Abstimmung fand unter außergewöhnlichen Umständen statt, da amerikanische und israelische Luftangriffe das Gebäude des Expertenrats kurz nach Ende der Sitzung dem Erdboden gleichmachten. Die Beisetzung des verstorbenen Obersten Führers ist verschoben worden, die Bestattung soll nun in der heiligen Stadt Maschhad statt in Teheran stattfinden.
Israelische Streitkräfte starteten ihre zehnte Angriffswelle gegen Teheran und griffen gleichzeitig Hisbollah-Infrastruktur in Beirut an. Die Urananreicherungsanlage in Natans erlitt bestätigte Schäden durch die Angriffe. Die Internationale Atomenergiebehörde bestätigte die Auswirkungen, meldete jedoch keine radioaktiven Lecks. Die Vergeltungsfähigkeit des Iran ist stark gesunken, wobei Pentagon-Vertreter einen Rückgang der iranischen Raketenabschüsse um 86 Prozent und einen Rückgang der Drohneneinsätze um 73 Prozent im Vergleich zum ersten Konflikttag vermeldeten. Verteidigungsminister Pete Hegseth erklärte gegenüber Journalisten, die USA stünden erst am Anfang und beschleunigten die Operationen, anstatt sie zu verlangsamen.
Der Konflikt zog weiterhin regionale Akteure hinein. Katars Luftwaffe schoss zwei iranische Su-24-Bomber mit Eurofighter Typhoons ab, was den ersten Luftkampfeinsatz in der Geschichte des Golfstaates darstellte. Eine iranische ballistische Rakete fing die NATO-Luftverteidigung über dem türkischen Luftraum ab, während eine Drohne das US-Konsulat in Dubai traf. Der Irak erlebte einen vollständigen landesweiten Stromausfall, nachdem der Iran die Gaslieferungen gekappt hatte, die einen Großteil des irakischen Stromnetzes versorgten. Der US-Senat lehnte mit 47 zu 53 Stimmen eine Resolution zu den Kriegsvollmachten ab, die den Präsidenten zum Truppenabzug gezwungen hätte. Senator John Fetterman stimmte als einziger Demokrat gegen die Maßnahme, und Senator Rand Paul war der einzige Republikaner, der sie unterstützte.
Die humanitären Folgen nahmen rasch zu. Die kurdische Menschenrechtsorganisation Hengaw meldete mehr als 2.400 Tote im Iran, während die in den USA ansässige Human Rights Activists News Agency 912 bestätigte zivile Todesfälle dokumentierte, darunter 181 Kinder unter zehn Jahren. In Israel kamen mindestens 11 Menschen durch iranische Raketenangriffe ums Leben, darunter acht bei einem einzelnen Angriff auf Beit Schemesch. Sechs US-Soldaten sind seit Beginn der Operationen gefallen. Die globalen Finanzmärkte schwankten aufgrund des Konflikts erheblich, wobei der südkoreanische KOSPI-Index um 12,06 Prozent einbrach, der stärkste Tagesverlust in der Geschichte des Landes. Die Ölpreise schwankten zwischen 81 und 85 Dollar pro Barrel, während große Seeversicherer ankündigten, die Deckung für Schiffe in der Straße von Hormus ab dem 5. März zurückzuziehen. Antikriegsproteste fanden in etwa 50 US-Städten statt, wobei die Organisatoren einen landesweiten Protesttag für den 8. März planen. Bei den Vereinten Nationen blockierten Russland und China das von der US-Präsidentschaft vorgeschlagene Arbeitsprogramm des Sicherheitsrats aufgrund von Einwänden im Zusammenhang mit der Iran-Krise.
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