El conflicto con Irán se intensificó drásticamente en sus días quinto y sexto cuando un submarino de la armada estadounidense torpedeó y hundió la fragata iraní IRIS Dena en el estrecho de Ormuz, lo que constituyó la primera destrucción confirmada por torpedo submarino desde la Segunda Guerra Mundial. Aproximadamente 130 marineros se encontraban a bordo del buque cuando se hundió, según funcionarios militares estadounidenses. El ataque se produjo cuando el general Dan Caine, jefe del Estado Mayor Conjunto de Estados Unidos, declaró que las fuerzas estadounidenses e israelíes habían neutralizado efectivamente la capacidad naval de Irán, con más de 20 buques iraníes hundidos o destruidos desde el inicio de las operaciones el 28 de febrero.
En un acontecimiento político paralelo de enorme trascendencia, la Asamblea de Expertos de Irán se reunió secretamente en Qom el 4 de marzo y eligió a Mojtaba Jamenei, el hijo de 55 años del asesinado líder supremo ayatolá Alí Jamenei, como su sucesor. La votación tuvo lugar en circunstancias extraordinarias, ya que los ataques aéreos estadounidenses e israelíes arrasaron el edificio de la Asamblea de Expertos poco después de que concluyera la sesión. El funeral del antiguo líder supremo ha sido aplazado, y el entierro está ahora previsto en la ciudad sagrada de Mashad en lugar de Teherán.
Las fuerzas israelíes lanzaron su décima oleada de ataques contra Teherán, al tiempo que atacaban infraestructuras de Hezbolá en Beirut. La instalación de enriquecimiento nuclear de Natanz sufrió daños confirmados por los bombardeos, y el Organismo Internacional de Energía Atómica verificó el impacto pero informó de que no se habían producido fugas radiactivas. La capacidad de represalia de Irán disminuyó considerablemente, y funcionarios del Pentágono informaron de una caída del 86 por ciento en los lanzamientos de misiles iraníes y del 73 por ciento en los despliegues de drones en comparación con el primer día de conflicto. El secretario de Defensa Pete Hegseth afirmó ante los periodistas que Estados Unidos apenas estaba comenzando y que estaba acelerando, no desacelerando.
El conflicto siguió involucrando a actores regionales. La fuerza aérea de Catar derribó dos bombarderos iraníes Su-24 utilizando cazas Eurofighter Typhoon, en lo que constituyó el primer combate aéreo de la historia del Estado del Golfo. Un misil balístico iraní fue interceptado sobre el espacio aéreo turco por los sistemas de defensa aérea de la OTAN, mientras un dron golpeó el consulado estadounidense en Dubái. Irak sufrió un apagón eléctrico total después de que Irán cortara el suministro de gas que alimentaba gran parte de la red eléctrica del país. El Senado de Estados Unidos rechazó por 47 votos contra 53 una resolución sobre poderes de guerra que habría obligado al presidente a retirar las fuerzas, siendo el senador John Fetterman el único demócrata en votar en contra de la medida y el senador Rand Paul el único republicano en apoyarla.
El costo humanitario aumentó rápidamente, con la organización kurda de derechos humanos Hengaw informando de más de 2.400 muertos en Irán, mientras que la agencia estadounidense Human Rights Activists News Agency documentó 912 muertes civiles confirmadas, incluidos 181 niños menores de diez años. En Israel, al menos 11 personas han muerto por los impactos de misiles iraníes, incluidas ocho en un único ataque sobre Beit Shemesh. Seis militares estadounidenses han muerto desde el inicio de las operaciones. Los mercados financieros mundiales se tambalearon por el conflicto, con el índice KOSPI de Corea del Sur desplomándose un 12,06 por ciento en su mayor caída diaria de la historia. Los precios del petróleo oscilaron entre 81 y 85 dólares por barril, mientras las principales aseguradoras marítimas anunciaron la retirada de la cobertura para los buques que transiten por el estrecho de Ormuz a partir del 5 de marzo. Las manifestaciones contra la guerra se celebraron en aproximadamente 50 ciudades estadounidenses, con los organizadores planificando una jornada nacional de protesta para el 8 de marzo. En las Naciones Unidas, Rusia y China bloquearon el programa de trabajo propuesto por la presidencia estadounidense del Consejo de Seguridad por objeciones relacionadas con la crisis iraní.
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